一、分子生物學(xué)常用貯存液的配制

1．30%丙烯酰胺溶液

【配制方法】將 29g 丙怖酷膠和 1gN ，N’- 亞甲雙丙怖酷膠溶于總體積為 60ml  的水中。加熱至 37校溶解之， 補(bǔ)加水至終體積為 100ml。用濾器（0.45μm 孔徑） 過(guò)濾除菌，查證該溶液的 pH 值應(yīng)不大于 7.0，置棕色瓶中保存于室溫。

【注意】丙怖酷膠具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性并可以通過(guò)皮膚吸收，其作用具累積性。 稱(chēng)量丙怖酷膠和亞甲雙丙怖酷膠時(shí)應(yīng)戴手套和面具?？烧J(rèn)為聚丙怖酷膠無(wú)毒， 但

也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因?yàn)樗€可能會(huì)含有少量未聚合材料。

一些價(jià)格較低的丙怖酷膠和雙丙怖酷膠通常含有一些金屬離子， 在丙怖酷膠貯存 液中加入大約 0.2 體積的單床混合樹(shù)脂（MB-1Mallinckrodt），攪拌過(guò)夜，然后

用 Whatman 1 號(hào)濾紙過(guò)濾以純化之。

在貯存期間，丙怖酷膠和雙丙怖酷膠會(huì)緩慢轉(zhuǎn)化成丙怖酷和雙丙怖酸。 2．40%丙烯酰胺

【配制方法】把380g 丙烯酰胺（DNA 測(cè)序級(jí)）和20gN，N’- 亞甲雙丙烯酰胺溶 于總體積為 600ml 的蒸餾水中。繼續(xù)按上述配制 30%丙烯酰胺溶液的方法處理，

但加熱溶解后應(yīng)以蒸餾水補(bǔ)足至終體積為 1L。

【注意】見(jiàn)上述配制 30%丙烯酰胺的說(shuō)明,40%丙烯酰胺溶液用于 DNA 序列測(cè)定。 3．放線(xiàn)菌素D 溶液

【配制方法】把 20mg 放線(xiàn)菌素 D 溶解于 4ml 100%乙醇中， 1:10 稀釋貯存液，

用 100%乙醇作空白對(duì)照讀取 OD440 值。放線(xiàn)菌素 D（分子量為 1255）純品在水 溶液中的摩爾消化系數(shù)為 21，900，故而 1mg/ml 的放線(xiàn)菌素 D 溶液在 440nm 處 的吸光值為 0.182，放線(xiàn)菌素 D 的貯存液應(yīng)放在包有箔片的試管中， 保存于-20℃。 【注意】放線(xiàn)菌素 D 是致畸劑和致癌劑,配制該溶液時(shí)必須戴手套并在通風(fēng)櫥內(nèi) 操作, 而不能在開(kāi)放在實(shí)驗(yàn)桌面上進(jìn)行,謹(jǐn)防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。  藥廠提供的作治療用途的放線(xiàn)菌素 D 制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過(guò)測(cè)  量貯存液在 440nm 波長(zhǎng)處的光吸收確定放線(xiàn)菌素 D 的濃度，這類(lèi)制品便可用于

抑制自身引導(dǎo)作用。

4．0.1mol/L 腺苷三磷酸（ATP ）溶液

【配制方法】在 0.8ml 水中溶解 60mg ATP, 用 0.1mol/L NaOH 調(diào)至 pH 值至 7.0， 用蒸餾水定容 1ml，分裝成小份保存于-70℃

5．10mol/L 乙酸酰溶液

【配制方法】把 770g 乙酸酰溶解于 800ml 水中，加水定容至 1L 后過(guò)濾除菌。 6．10%過(guò)硫酸銨溶液

【配制方法】把 1g 過(guò)硫酸銨溶解于終量為 10ml 的水溶液中， 該溶液可在 4℃保 存數(shù)周。

7．BCIP 溶液

【配制方法】把 0.5g 的 5-溴-4- 氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽（BCIP）溶解于 10ml 100% 的二甲基甲酰胺中，保存于 4℃

8．2×BES 緩沖鹽溶液

【配制方法】用總體積 90ml 的蒸餾水溶解 1.07g 鹽溶液 BES[N ，N-雙-2-氨基乙磺酸 、1.6g NaCl 和 0.027gNa2HPO4 ，室溫下用 HCl 調(diào)節(jié)該溶液的 pH 值至 6.96、然后加入蒸餾水定容至 100ml，用 0.22μm濾器過(guò)濾除菌， 分裝成 小份，保存于-20℃。

9．1mol/L CaCl2 溶液

【配制方法】在 200ml 蒸餾水中溶解 54g CaCl2 · 6H2O，用 0.22μm 濾器過(guò)濾除菌， 分裝成 10ml 小份貯存于-20℃。

【注意】制備感受態(tài)細(xì)胞時(shí)， 取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至 100ml，用 Nalgene 濾器（0.45μm孔徑）過(guò)濾除菌，然后驟冷至 0℃。

10．2.5mol/L CaCl2 溶液

【配制方法】在 20ml 蒸餾水中溶解 13.5g CaCl2·6H2 O，用 0.22μm 濾器過(guò)濾除菌 ， 分裝成 1ml 小份貯存于-20℃。

11．1mol/L 二硫蘇糖醇（DTT ）溶液

【配制方法】用 20ml 0.01mol/L 乙酸鈉溶液（pH5.2）溶解 3.09g DTT，過(guò)濾除 菌后分裝成 1ml 小份貯存于-20℃。

【注意】DTT 或含有 DTT 的溶液不能進(jìn)行高壓處理。

12．脫氧核苷三磷酸（ dNTP ）溶液

【配制方法】把每一種 dNTP 溶解于水至濃度各為 100mmol/L 左右，用微量移  液器吸取0.05mol/l Tris 堿分別調(diào)節(jié)每一dNTP 溶液的pH 值7 . 0（用 pH 試紙檢測(cè) ）， 把中和后的每種 dNTP 溶液各取一份作適當(dāng)稀釋?zhuān)?在下表中給出的波長(zhǎng)下讀取光

密度計(jì)算出每種 dNTP 的實(shí)際濃度，然后用水稀釋成終濃度為 50mmol/L 的

dNTP，分裝成小份貯存于-70℃。

13．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液

【配制方法】在800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na·2H2O）， 在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用 NaOH 調(diào)節(jié)溶液的 pH 值至 8.0（約需 20g NaOH    顆粒）然后定容至 1L，分裝后高壓滅菌備用。

【注意】EDTA 二鈉鹽需加入 NaOH 將溶液的 pH 值調(diào)至接近 8.0,才能全溶解。 14．溴化乙錠（ 10mg/ml 溶液）

【配制方法】在 100ml 水中加入 1g 溴化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時(shí)以確保其全溶 解，然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，保存于室溫。

【注意】小心： 溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑并有中度毒性， 使用含有這種染料的溶液時(shí) 務(wù)必戴上手套，稱(chēng)量染料時(shí)要戴面罩。

15．2×HEPES 緩沖鹽溶液

【配制方法】用總量為 90ml 的蒸餾水溶解 1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g

Na2PO4·2H2O 、0.2g 葡聚糖和 1gHEPES ，用 0.5mol/l NaOH 調(diào)節(jié) pH 值至 7.05，

再用蒸餾水定容至 100ml。用 0.22μm濾器過(guò)濾除菌， 分裝成 5ml 小份， 貯存于- 20℃。

16．IPTG 溶液

【配制方法】IPTG 為異丙基硫代- β-D-半乳糖苷（分子量為 238.3），在 8ml 蒸 餾水中溶解 2g IPTG 后， 用蒸餾水定容至 10ml，用 0.22μm濾器過(guò)濾除菌， 分裝 成 1ml 小份貯存于-20℃。

17．1mol/L 乙酸鎂溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 214.46g 四水乙酸鎂， 用水定容至 1L 過(guò)濾除菌。 18．1mol/L MgCl2 溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 203.4g MgCl2·6H2O，用水定容至 1L，分裝成小 份并高壓滅菌備用。

【注意】MgCl2 極易潮解， 應(yīng)選購(gòu)小瓶（如 100g）試劑， 啟用新瓶后勿長(zhǎng)期存放。 19. β- （BME ）溶液

【配制方法】一般得到的是 14.4mol/L 溶液，應(yīng)裝在棕色瓶中保存于 4℃。

【注意】BME 或含有 BME 的溶液不能高壓處理。

20．NBT 溶液

【配制方法】把 0.5g 氯化氮藍(lán)四唑溶解于 10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于 4℃。

21．酚/氯仿溶液

【配制方法】把酚和氯仿等體積混合后用 0.1mol/L Tris ·HCl(pH7.6)抽提幾次以平 衡這混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的 0.01mol/l Tris ·HCl(pH=7.6)液層,  保存于 4℃。

【注意】酚腐蝕性很強(qiáng)， 并可引起嚴(yán)重灼傷， 操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡， 穿防護(hù) 服。所有操作均應(yīng)在化學(xué)通風(fēng)櫥中進(jìn)行。與酚接觸過(guò)的部位皮膚應(yīng)用大量的水清

洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。

22．10mmol/L （ PMSF ）溶液

【配制方法】用異丙醇溶解 PMSF 成 1.74mg/ml（10mmol/L），分裝成小份貯存 于-20℃。如有必要可配成濃度高達(dá) 17.4mg/ml 的貯存液（100mmol/L）。

【注意】PMSF 嚴(yán)重?fù)p害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、吞進(jìn)或通過(guò)皮膚吸收 后有致命危險(xiǎn)。 一旦眼睛或皮膚接觸了 PMSF，應(yīng)立即用大量水沖洗之。凡被

PMSF 污染的衣物應(yīng)予丟棄。

PMSF 在水溶液中不穩(wěn)定。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中。

PMSF 在水溶液中的活性喪失速率隨 pH 值的升高而加快， 且 25℃的失活速率高 于 4℃。pH 值為 8.0 時(shí),20μmmol/l PMSF 水溶液的半壽期大約為 85min，這表明  將 PMSF 溶液調(diào)節(jié)為堿性（pH>8.6）并在室溫放置數(shù)小時(shí)后,可安全地予以丟棄。 23．磷酸鹽緩沖溶液（PBS ）溶液

【配制方法】在800ml 蒸餾水中溶解 8g NaCl、0.2g KCl、1.44gNa2HPO4 和 0.24g KH2PO4,用 HCl 調(diào)節(jié)溶液的 pH 值至 7.4 加水定容至 1L，在 15lbf/in2(1034 × 105Pa) 高壓下蒸氣滅菌 20min。保存于室溫。

24．1mol/L 乙酸鉀（pH=7.5 ）溶液

【配制方法】將 9.82g 乙酸鉀溶解于 90ml 純水中，用 2mol/L 乙酸調(diào)節(jié) pH 值至

7.5 后加入純水定容到 1L，保存于-20℃。

25． 乙酸鉀溶液（ 用于堿裂解）

【配制方法】在 60ml 5mol/L 乙酸鉀溶液中加入 11.5ml 冰乙酸和 28.5ml 水，即

成鉀濃度為 3mol/L 而乙酸根濃度為 5mol/L 的溶液。

26．3mol/L 乙酸鈉（pH5.2 和 pH7.0 ）溶液

【配制方法】在 80ml 水中溶解 408.1g 三水乙酸鈉，用冰乙酸調(diào)節(jié) pH 值至 5.2 或用稀乙酸調(diào)節(jié) pH 值至 7.0，加水定容到 1L，分裝后高壓滅菌。

27．5mol/L NaCl 溶液

【配制方法】

在 800ml 水中溶解 292.2g NaCl 加水定容至 1L，分裝后高壓滅菌。 28．10%十二烷基硫酸鈉（ SDS ）溶液

【配制方法】在 900ml 水中溶解 100g 電泳級(jí) SDS，加熱至 68℃助溶， 加入幾滴 濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的 pH 值至 7.2，加水定容至 1L，分裝備用。

【注意】SDS 的微細(xì)晶粒易擴(kuò)散， 因此稱(chēng)量時(shí)要戴面罩， 稱(chēng)量完畢后要清除殘留 在稱(chēng)量工作區(qū)和天平上的 SDS ，10%SDS 溶液無(wú)須滅菌。

29．20×SSC 溶液

【配制方法】在800ml 水中溶解 175.3g NaCl 和 88.2g 檸檬酸鈉， 加入數(shù)滴 10mol/l NaOH 溶液調(diào)節(jié) pH 值至 7.0，加水定容至 1L，分裝后高壓滅菌。

30．20×SSPE 溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4·H2 O 和 7.4g EDTA, 用 NaOH 溶液調(diào)節(jié) pH 值至 7.4（約需 6.5ml 10ml/L NaOH）,加水定容至 1L,分裝 后高壓滅菌。

31．100% C2HCl3O2溶液

【配制方法】在裝有 500g TCA 的瓶中加入 227ml 水，形成的溶液含有 1 0 0 %（M/V）

TCA。

32．1mol/L Tris 溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 121.91g Tris 堿,加入濃 HCl 調(diào)節(jié) pH 值至所需值。

pHHCl          7.4 70ml                     7.6 60ml                           8.0 42ml

 應(yīng)使溶液冷至室溫后方可最后調(diào)定 pH 值，加水定容至 1L，分裝后高壓滅菌。 【注意】如 1mol/L 溶液呈現(xiàn)黃色，應(yīng)予丟棄并置備質(zhì)量更好的 Tris。

盡管多種類(lèi)型的電極均不能準(zhǔn)確測(cè)量 Tris 溶液的 pH 值，但仍可向大多數(shù)廠商購(gòu) 得合適的電極。

Tris 溶液的 pH 值因溫度而異， 溫度每升高 1℃ , pH 值大約降低 0.03 個(gè)單位。例 如： 0.05mol/L 的溶液在 5℃ 、25℃、和 37℃時(shí)的 pH 值分別為 9.5、8.9 和 8.6。 33．Tris 緩沖鹽溶液（ TBS ）（25mmol/l Tris ）

【配制方法】在800ml 蒸餾水中溶解 8g NaCl、0.2g KCl 和 3g Tris 堿，加入 0.015g

酚并用 HCl 調(diào)至 pH 值至 7.4，用蒸餾水定容至 1L，分裝后在

151bf/in2(1.034 × 105Pa)高壓下蒸汽滅菌 20min，于室溫保存。

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