干細胞培養基的制備和使用是干細胞培養成功的關鍵,但在實際操作中需要注意多個細節以確保細胞活性、穩定性和實驗可重復性。
  1.嚴格遵循配方
  根據干細胞類型選擇專用培養基配方,不可隨意替換成分或調整比例(如生長因子濃度、血清批號)。
  例:多能干細胞依賴bFGF和LIF維持未分化狀態,神經干細胞需要EGF/FGF-2組合。
  2.無菌操作
  全程在超凈工作臺內操作,避免微生物污染(尤其血清、添加劑易滋生細菌)。
  分裝后的培養基需抽樣檢測無菌性(如細菌培養試驗)。
  3.現配現用原則
  生長因子和活性成分需現配現用,避免反復凍融失效。
  長期儲存需冷凍,使用時快速解凍并一次性用完。
  4.過濾除菌
  使用濾膜正壓過濾,避免高壓滅菌(高溫會破壞生長因子和蛋白質成分)。
  5.保存條件
  短期保存:4℃冷藏(≤1周),避免反復開蓋污染。
  長期儲存:分裝后-20℃~-80℃冷凍,標注名稱、濃度和日期。
  干細胞培養基關鍵注意事項:
  1.無菌操作
  全程在超凈工作臺內完成,避免微生物污染(尤其血清和添加劑易滋生細菌)。
  分裝后培養基可抽樣檢測無菌性(如細菌培養試驗)。
  2.成分穩定性
  生長因子、β-ME等活性成分需現配現用,避免反復凍融。
  長期儲存需冷凍,使用時快速解凍并一次性用完。
  3.批次一致性
  不同批次的血清或基礎培養基可能存在差異,需通過預實驗驗證穩定性。
  建議使用同一批號血清,并記錄詳細信息(如供應商、生產日期)。
 
